西门塔尔牛口蹄疫防控指南
西门塔尔牛口蹄疫防控指南
口蹄疫诊断检测技术
对FMD 这样传播迅速、危害严重的传染病,尽早发现及确诊对于及时采取有效措施、防控疫情蔓延至关重要。
1 西门塔尔牛样品的采集
病料采集的好坏对于诊断结果的得出至关重要,以尚未溃破的水泡皮和水泡液为最好。其他样品包括鼻拭子、食道-咽部刮取物 (OP 液)、抗凝血或血清、牛奶等,死亡动物可采集淋巴结、扁桃体、脊髓及心脏。组织样品置 pH 7.2-7.6 的甘油缓冲液中冰冻保存。
2 西门塔尔牛病原检测
(1)病毒分离。检测口蹄疫的黄金标准,一般用犊牛甲状腺原代细胞分离牛源病毒,用猪肾细胞系 IBRS-2、PK-15 等分离猪源病毒。仓鼠肾细胞系 BHK-21,2-7 日龄的乳鼠也常用于分离FMDV。乳鼠接种FMDV 后 (24-72h),出现典型症状,表现为四肢麻痹、呼吸困难而死。
(2)补体结合试验CFT。国际通用的 FMD 经典检测和定型方法,于1943年建立。CFT 定型诊断的结果较为准确,但是敏感性不高,且易受样品中的亲补体物质和抗补体物质的干扰,已被间接夹心 ELISA 来代替。
(3)病毒中和实验。最经典和最权威的检测方法,常用做其它方法的参照,诊断结果可靠,缺点是要动用活毒只能在专门实验室进行,且工作量大、需要的时间长。
(4)反向间接血凝试验。将口蹄疫病毒的抗体以化学方法偶联于醛化的绵羊红细胞上,当贴附于血球的抗体与游离的抗原相遇并形成抗原一抗体凝集时,绵羊红细胞也随之凝集,出现了肉眼可见的血球凝集现象。该法简单、快捷,适合于基层使用,曾作为是我国 FMDV 鉴定的行业标准。
(5)间接夹心ELISA。又称抗原捕获 ELISA,该技术快速、敏感、准确,是OIE 推荐的定型的首选方法。还可用于分析制苗毒株株与流行毒之间的抗原相关性,推测相应的免疫保护力,评价疫苗毒的免疫覆盖率。
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